鹿流行性出血病病毒实时荧光PCR检测方法的初步建立

利用鹿流行性出血病（EHD）病毒核酸的保守靶序列（VP7）,设计引物和TaqMan荧光探针,建立了EHDV荧光定量RT-PCR技术,并进行了特异性、敏感性、重复性等实验评价。结果显示,该技术可有效检出EHD-1、EHD-2、EHD-4、EHD-7型病毒,与蓝舌病病毒（BTV）等病毒无交叉反应;对阳性模板（重组质粒）的检测灵敏度为1个copies;重复检测CV〈5%。因此,所建立的EHDV TaqMan/荧光定量RT-PCR方法可为鹿流行性出血病病毒检测提供一种快速、可靠的病原检测手段。     

云南省宣威叶府花园规划设计方案

云南宣威叶府花园设计方案是根据地理概况,从立意、构思总体出发,结合现状,以“绿水千家绕”为花园景观的主题展开景点布置,动静结合,建筑小品与植物及水体相辅相成,创造出优美的庭院园林景观.     

犬脊髓造影用双北的效果评价

[目的]为临床诊断犬脊椎疾病提供科学理论和技术方法。[方法]通过对犬用双北进行脊髓造影的方法,探讨双北对犬脊髓疾病诊断的价值,研究双北脊髓造影的影像效果、延时效果和毒副作用。[结果]以0.45 ml/kg双北对犬脊髓造影时X光片的效果最佳,此时X线平片能满足临床诊断的要求,而拍照最佳时间为10～20 min。双北造影后在动物机体内的消失速度均与其造影浓度有关。[结论]0.45 ml/kg双北造影时的影像效果能满足临床诊断犬脊椎疾病的需要。     

鹿流行性出血病毒分子生物学研究进展

鹿流行性出血病毒是一种在全世界野生及驯养的有蹄动物中广泛存在的重要病原体.该病毒属呼肠病毒科环状病毒属,有12个血清型,是一种有10个节段(L1-L3、M4-M6、S7-S10)的双链RNA病毒,编码10个蛋白(VP1-7和NS1、NS2、NS3/NS3A).VP7蛋白具有很强的抗原性且保守性最高.VP2与病毒型特异性有关,可诱导产生中和抗体.VP3为群特异性抗原,高度保守,具有亲水性保守区域.非结构蛋白NS1、NS2和NS3/NS3A及其编码序列均相当保守.该病毒的分子生物学诊断技术主要有PCR和核酸探针杂交技术.     

羊痘病毒实时荧光定量TaqManPCR检测方法的建立

参照羊痘病毒（CaPV）P32的基因序列，设计合成了2套引物和1条探针，建立了实时荧光定量PCR技术，对细胞培养物、皮肤丘疹、痂皮等组织病料中的GPV进行了特异性检测和敏感性试验。结果显示，用300nmol／L引物浓度和200nmol／L探针浓度，获得的CT值较小，而△Rn最大；可检测到相当于0．1TCID50的病毒DNA；制作的标准曲线中各浓度范围内有极好的线性关系且线性范围宽，相关系数为0．9995以上；组内和组间试验重复性的变异系数分别为2．3％和3．4％；与常规的PCR相比较，该方法具有快速、特异、敏感、可定量，可同时检测大量样品等优点。表明，荧光TaqMan PCR是一种检测CaPV的良好方法，可对组织病料中低含量的CaPV或持续带毒宿主进行准确检测。     

小反刍兽疫病毒H糖蛋白基因原核表达载体的构建及表达

参照GenBank中小反刍兽疫病毒（PPRV）H抗原基因序列，人工合成了PPRVH基因，将其克隆至PUC18-T质粒中，转化E．coli JM109感受态细胞，构建并选择PPRVH基因克隆重组质粒，经核苷酸序列分析正确，将其克隆至pBAD／Thio—TOPO载体中，转化E．coli TOP10感受态细胞，核苷酸序列分析证实，成功构建了PPRVH基因重组表达载体。经不同浓度L-阿拉伯糖诱导，可稳定、高效地表达PPRVH抗原。SDS-PAGE分析结果表明，用终浓度为0．2g／L的L-阿拉伯糖诱导5h的表达量最高，表达蛋白为分子质量约83ku的融合蛋白；经薄层扫描分析，其表达产量约占菌体总蛋白的10％。Western-blotting检测表明，诱导的蛋白能与PPRVH蛋白单抗发生特异性反应，说明表达的融合蛋白中含有PPRVH糖蛋白抗原。     

女子沙滩排球垫球调整在比赛中的运用对比分析

通过文献资料法、录像统计法、观察分析法，以部分世界女子沙滩排球巡回赛、全国女子沙滩排球巡回赛为研究对象，对沙滩排球垫球调整技术在比赛中的运用进行研究分析。认为沙滩排球比赛受自然环境的影响和规则的限制，传球调整容易造成持球和连击，而我国沙滩排球队伍仍然更多采用传球调整技术。重视垫球调整是提高我国沙滩排球技战术水平与世界接轨的发展趋势，也是适应自然条件和适应规则的有效措施。     

云南出口新鲜松茸产地属性DNA指纹图谱构建

收集19个出口松茸主产地的97个样本,使用逆转录因子的DNA分子标签对样本基因组进行PCR扩增;为尽可能区分原产地,对某些产地的样本增加先使用限制性内切酶处理基因组DNA,再次使用逆转录分子标签的步骤。采用全自动DNA分析系统获得一系列DNA指纹图谱。通过比较分析找到同一地理居群共有的DNA指纹图谱特征以及酶切前后的图谱差异。这些指纹图谱特征与松茸原产地间存在显著相关性。     

猪水泡病病毒RT-PCR检测方法的建立

根据基因库中的猪水泡病病毒(SVDV)高度保守的VP1基因的序列,设计了与SVDV互补的2对特异性引物,通过对影响PCR扩增因素的筛选,成功地扩增出251bp和366bp特异性条带,将其克隆入pMD18-T载体中,并进行序列测定,与已发表的SVDV基因比较发现,核苷酸的同源性为100%,证实为SVDV的VP1段基因。通过检测FMDV、VSV、BHK21细胞等,对照的扩增结果均为阴性,验证其特异。对SVDVRNA进行10倍系列稀释后检测,结果SVDVRNA在10-4稀释度时仍能检测到阳性,说明具有较好的敏感性。此项试验能稳定、高效、快速地检测出猪水泡病病毒。     

云南边境检疫性实蝇风险分析研究

近年来,云南边境口岸检验检疫机关在进境水果和蔬菜中检疫截获实蝇害虫17种,大部分属国家禁止传入的危险性害虫。从截获的批次和数量来看,优势种类有桔小实蝇（Bactrocera dorsalis Hendel)、瓜实蝇（Bactrocera cucurbitae （Coquillett)和南瓜实蝇（Bactrocera tau (Walker)等。针对缅甸、越南、老挝等国家的实蝇种类、云南边境情况、水果和蔬菜类型,结合实蝇的生物学习性,分析实蝇在云南的适生区域和非适生区,并提出检疫措施。